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实验室对蛋白样品中二硫苏糖醇DTT残留含量的色谱检测方法

实验室对蛋白样品中二硫苏糖醇DTT残留含量的色谱检测方法
2023年07月31日 14:01 新浪网 作者 微源检测

  二硫苏糖醇(简称为DTT),外观为白色粉末,是一种小分子有机还原剂,其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定性,被广泛应用于细胞生物学、生物化学和生物医学应用领域,可作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂,蛋白质中双硫键的还原等,有着较为广泛的应用。

  

  但是需要注意二硫苏糖醇(DTT)还原性较强,在临床和实验领域可能会破坏蛋白质结构从而引起酶失活现象,造成生物分子的氧化损伤因此有必要对要药品中的二硫苏糖醇(DTT)含量进行检测。考虑到二硫苏糖醇(DTT)容易被氧化,响应不稳定等性质,实验室需开发一种满足要求的检测方法。

  

  查阅文献资料分享一种利用超高效液相色谱UPLC检测二硫苏糖醇(DTT)含量的办法。配制DTT标准品水溶液;样品滤液;超纯水作为空白溶液;DTT标准品、样品滤液和超纯水中加入过量的Cu(NO3)2混匀后获得混合物进行UPLC分析,获得DTT峰;将标准品水溶液获得的DTT峰面积相对DTT浓度绘制标准曲线,利用外标法根据测得的DTT峰面积对样品中残留的DTT进行浓度定量。

  超高效液相色谱是一种基于小颗粒填料的液相色谱系统,支持更高的压力,更准确的流路体积控制,更好的线性,更高的灵敏度。在分离能力,灵敏度和专属性等方面有着巨大优势,近年在药物分析研究领域中得到了越来越多的应用。

  如果是蛋白中二硫苏糖醇的残留检测,还可以通过液质联用的方法,利用强大的定性定量能力对实现精准程度更高的检测,实验室可根据不同检测需求目的提供相应检测方案,实验室按照GMP要求进行相关管理,拥有光谱质谱色谱波谱等百余台精密检测设备,可对不同样品中的二硫苏糖醇(DTT)含量进行测定。

  

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