一、minigene技术概述：
mRNA前体的正确剪接是真核生物基因表达的关键步骤，其剪接异常将会影响基因表达量或功能的异常。minigene技术又称为mRNA异常剪接体外验证实验，是一项针对突变位点是否影响mRNA剪接的细胞水平验证实验。通过克隆带有变异位点（包括剪切位点附近以及深度内含子中的点突变、插入及缺失等变异类型）的目标基因组片段，构建重组表达载体，转染细胞株，RNA抽提及cDNA反转，再利用电泳和测序技术验证该突变对mRNA剪接的影响(外显子缺失、内含子滞留)。
二、项目优势及服务特点：
由于该实验确实存在阴性结果的可能，即突变虽然位于剪切区域，但确实没有影响该位点的剪切。因此我们（1）首先会根据突变所在位置，结合生物信息学的方法，帮助客户预测得到阳性结果（即突变会影响剪切）的可能性，并设计整套优化实验方案；（2）随后会根据客户需求、疾病特点等因素，选取两种（及以上）不同的真核表达载体以及两种（及以上）不同组织来源的细胞系进行mRNA剪接验证，从而最大程度的保证获得阳性结果的可能。
三、minigene技术服务流程：
1. 针对基因结构特点和突变所在位置，进行生物信息学分析
2. 收到DNA样品后，钓取目的基因及重组表达载体构建
3. 细胞转染
4. RNA抽提及转录分析
四、样品寄送要求：
客户需提供突变检测报告及纯度质量合格的突变位点携带者（纯和、杂合均可）及正常人的基因组DNA，随冰袋一起寄送。
五、服务报告：
内容包括：生物信息学预测结果，minigene构建策略示意图，重组载体酶切及测序结果，minigene剪接结果跑胶图及测序结果。
六、实验周期及收费：
实验周期从收到DNA样本开始计算，一般在5-8周左右。收费根据待检测minigene外显子和内含子的序列长度以及突变所在位置、载体数量和细胞种类数量等因素均有差异，具体价格请详询。
七、联系方式：
武汉百翼生物技术有限公司，武汉高新大道666号光谷生物城B7栋，王博士 电话 027-87003398 18995600939
游侠点评：
之前很多朋友询问哪里可以做minigene体外细胞验证，经朋友介绍认识了武汉百翼的王博士，经测试实验靠谱，价格实惠,强烈推荐给有需要的朋友。
